Né le 25 février 1966 à Salisbury dans le Maryland, d'origine russe, Alexis Denisof fait ses études au St. Paul's Boarding School. Il résidera à Londres durant 15 ans. Atteint de paralysie faciale, ce handicap ne l'empêchera pas de se faire connaître par le rôle de Wesley dans la série télévisée Buffy contre les vampires en 1999 et le spin-off Angel, 1999 à 2004. Il est aujourd'hui marié à Alyson Hannigan, qui jouait le rôle de Willow Rosenberg dans la série Buffy contre les vampires, dans laquelle joua également Alexis le temps d'une courte saison. Le couple partage également l'écran dans la série How I Met Your Mother, où Alexis campe de temps en temps le personnage de Sandy Rivers, tandis qu'Alyson y tient l'un des rôles principaux. Le couple a une petite fille prénommée Satyana, née le 24 mars 2009, jour de l'anniversaire d'Alyson Hannigan.
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