Danny Glover s'intéresse au théâtre pendant ses études universitaires au San Francisco College. Après avoir fait son apprentissage au Black Actors' Workshop de l'American Conservatory Theater, il s'illustre dans de nombreux spectacles dont Macbeth, Suicide in B Flat de Sam Shepard, et dans quatre pièces du dramaturge sud-africain Athol Fugard, dont The Blood Knot et The Island.
En 1979, Danny Glover fait ses débuts au cinéma aux côtés de Clint Eastwood dans L'Évadé d'Alcatraz de Don Siegel. En 1985, après quelques années consacrées au petit écran, le comédien enchaîne trois compositions brillantes sous la direction de réalisateurs de renom. On le voit dans Witness de Peter Weir, Silverado de Lawrence Kasdan et surtout La Couleur pourpre de Steven Spielberg, qui le révèle auprès du grand public.
En 1987, c'est le triomphe public avec le film d'action L'Arme fatale de Richard Donner, où il inaugure son fameux duo avec Mel Gibson. La saga, composée de quatre films, donne très vite à l'acteur un capital sympathie indéniable auprès des spectateurs. Mais Glover cherche à se démarquer de l'image de ce flic massif proche de la retraite, en jouant notamment dans le film d'action Predator 2 ou dans la comédie dramatique
Grand Canyon.
En 1993, Danny Glover accepte de tenir le rôle-titre d'un policier noir en pleine Apartheid dans le premier film de Morgan Freeman en qualité de réalisateur, Bopha !. De plus en plus rare sur grand écran, il donne la réplique à Dennis Quaid dans le thriller La Piste du tueur en 1997, avant d'enchaîner sur le tournage de Beloved de Jonathan Demme, dans lequel il partage la tête d'affiche avec la présentatrice de télévision américaine Oprah Winfrey, qu'il avait déjà cottoyé dans La Couleur pourpre.
Après un petit rôle dans La Famille Tenenbaum, comédie douce-amère signée Wes Anderson, l'acteur explore un tout autre registre avec le film d'horreur Saw, puis confirme son goût de l'éclectisme en participant, en 2005, au Manderlay de Lars von Trier. En 2007, il est à l'affiche du biopic des Supremes, Dreamgirls, et prête sa voix au film d'animation
La Ferme en folie.
Il a apporté publiquement son soutien au président vénézuélien Hugo Chavez. Ce dernier a annoncé vouloir financer deux films de Danny Glover.
En 2009, il interprète le président des États-Unis dans la superproduction
2012 de Roland Emmerich. Depuis des années, il tente de produire son film Toussaint, qui évoque la vie du résistant haïtien Toussaint Louverture.