Originaire de San Francisco, en Californie, Darren est à moitié philippin et irlandais. Il a suivi des études au collège Saint-Ignatius. Darren Criss a appris à jouer un grand nombre d'instruments, comme le violon, la guitare, le piano et les percussions. Il jouait de la batterie dans un groupe avec son frère Chuck, jusqu'à ce que ce dernier déménage à New York pour développer sa carrière musicale (et par la suite se joindre au groupe de rock Freelance Whales). Darren entre ensuite l'université du Michigan, où il obtient en 2009 un diplôme d'acteur.
Criss fait partie du groupe de théâtre de production Team StarKid, formé par des étudiants en théâtre à l'université du Michigan. Son rôle le plus populaire avec l'équipe StarKid est Harry Potter dans A Very Potter Musical et A Very Potter Sequel, comédie musicale sur la série de J. K. Rowling dont il a composé une grande partie des chansons. Il est également l'auteur-compositeur principal de la prochaine production de l'équipe StarKid, Starship, qui sera réalisée en février 2011.
Le 9 novembre 2010, Criss rejoint le casting de Glee sur l'épisode Never Been Kissed et incarne le personnage de Blaine, un étudiant ouvertement gay, et leader du glee club de la Dalton Academy, une école rivale. Le créateur de Glee,
Ryan Murphy, a déclaré : « Darren a un rôle majeur... Il devient une sorte de mentor pour Kurt et puis peut-être son amour - il a dû quitter sa propre école parce qu'il était victime de harcèlement et va dans une école de garçons où il est accepté comme il est car cette école a une politique de tolérance zéro pour le harcèlement. Kurt l'admire vraiment et le respecte. Il joue quelqu'un qui a un an de plus que Chris Colfer »
En dehors de Team StarKid et Glee il a fait un passage en tant que Josh dans la série télévisée Eastwick et eu un rôle d'invité-vedette dans Cold Case : Affaires classées. Il a également sorti un EP, Human, sur iTunes durant l'été 2010, comprenant cinq titres : Human, Jaleousy, Sami, Not alone et Don't you. Not alone et Sami sont tous deux des morceaux apparus dans la production A Very Potter Musical, bien que Sami soit devenu Harry pour les circonstances.
En 2011, il fait une apparition dans le clip de Last Friday Night de la chanteuse
Katy Perry.