Donald Wolfit débute en 1920 au théâtre, domaine où il est particulièrement actif au long de sa carrière, notamment dans les pièces de William Shakespeare (voir la rubrique "Théâtre" ci-dessous). D'ailleurs, il nomme 'Shakespeare Company' la troupe itinérante qu'il crée et dirige. Au nombre de ses disciples, on compte
Ronald Harwood (qui lui consacrera une biographie) et Peter O'Toole.
Au cinéma, il apparaît dans trente-neuf films (majoritairement britanniques), entre 1931 et 1968. Mentionnons Svengali (film, 1954) (en) en 1954 -- où son interprétation du rôle-titre lui vaut l'année suivante une nomination au British Academy Film Award du meilleur acteur dans un rôle principal --, et Lawrence d'Arabie en 1962 où, dans le rôle du général Archibald Murray, il retrouve Peter O'Toole.
À la télévision, il contribue à un téléfilm en 1959 (une version téléfilmée de la pièce Volpone de Ben Jonson) et à treize séries, la plupart dédiées au théâtre, de 1952 à 1968.
Pour sa contribution au théâtre, Donald Wolfit est honoré en 1957 du grade de chevalier commandeur de l'ordre de l'Empire britannique (KBE).