Margaret Colin est la fille d'un officier de police de la ville de New York. Sa carrière d'actrice débute après avoir été diplômée de l'Université Hofstra en 1976.
L'actrice alterne aussi les premiers que les seconds rôles au cinéma ou la télévision. Parmi les plus connus, pour le cinéma, Dangereuse sous tout rapports, jouant aux côtés de
Melanie Griffith, Trois Hommes et un bébé, remake de
Trois Hommes et un couffin, La Femme du boucher, où elle joue aux côtés de
Demi Moore,
Independence Day, où elle joue la conseillère du Président des États-Unis, Infidèle, remake de La Femme Infidèle, où elle joue aux côtés de
Diane Lane,
Richard Gere et
Olivier Martinez et Des étoiles plein les yeux où elle incarne la mère de
Katie Holmes.
À la télévision, elle a joué dans plusieurs séries et téléfilms.
Margaret Colin est une militante pro-vie et fait partie de l'association Feminists for Life.