À 17 ans, elle gagne un concours de talents et commence à jouer divers rôles dans des vaudevilles. Elle est remarquée par l'animateur Max Fleischer alors à la recherche d'une actrice pour interpréter la voix de son personnage Betty Boop. L'interprétation du Boop Boop A Dop' faite par Questel de façon similaire à celle de l'interprète d'origine, Helen Kane, tout en rappelant l'actrice Clara Bow par son côté irrévérencieux, correspond exactement à ce que cherche Fleischer. De 1930 à 1939, Questel offre sa voix à Betty Boop dans plus de 150 dessins animés. Elle sort également un disque, On The Good Ship Lollypop, qui se vend à plus de 2 millions d'exemplaires.
Durant la même période, et jusqu'en 1957, elle offre sa voix à Olive dans les dessins animés de Popeye. Pour cette voix nasillarde, elle s'inspire de l'actrice Zasu Pitts.
Elle ne fait ses premières apparitions à l'écran que dans les années 1960, notamment dans
Funny Girl (1968) où on l'aperçoit au début du film jouer aux cartes avec la mère de Fanny Brice. On la retrouve ensuite dans deux films de Woody Allen :
Zelig en 1983 et New York Stories (1989) où elle joue le rôle de la mère d'Allen. Son dernier film sera Christmas Vacation la même année. En 1988, elle fut à nouveau la voix de Betty Boop dans Qui veut la peau de Roger Rabbit. On se souvient également de ses nombreuses apparitions dans des publicités pour des produits ménagers, notamment dans le rôle de Tante Bluebell.