Esmond Knight débute en 1925 au théâtre, où il sera très actif jusqu'en 1984, principalement à Londres, et en particulier dans les pièces de William Shakespeare. Hors l'Angleterre, il jouera une fois à Broadway (New York) en 1953.
Au cinéma, il apparaît de 1928 à 1987, notamment dans plusieurs films britanniques du tandem
Powell-
Pressburger, ou encore dans des réalisations de Laurence Olivier (dont ses adaptations de trois pièces de Shakespeare en 1944, 1948 et 1955), avec qui il a également collaboré au théâtre. Notons qu'en 1960, dans le film Coulez le Bismarck !, il interprète le rôle de capitaine du Prince of Wales, sur lequel il servait en 1941 lors des opérations contre le Bismarck. Il fut alors grièvement blessé et devint aveugle, ne recouvrant que très partiellement la vue deux ans plus tard (il en sera handicapé durant toute la suite de sa carrière).
Dès 1937, il participe pour la télévision naissante à des adaptations de pièces de théâtre et par la suite, joue dans des téléfilms et séries, jusqu'en 1987.
De 1946 jusqu'à sa mort en 1987, Esmond Knight est l'époux en secondes noces de l'actrice Nora Swinburne, avec laquelle il joue plusieurs fois, au théâtre et au cinéma.