Originaire de Belgique, Jonathan Zaccaï envisage d'abord une carrière de réalisateur avant de se tourner vers le métier d'acteur. Après un passage par la publicité, il figure dans de nombreux spots diffusés pour certains en Grande-Bretagne et quelques apparitions au cinéma (La Révolte des enfants, 1991) et à la télévision (Lifeline, 1996), il campe le petit ami insatisfait de Corinne Debonnière dans Petite Chérie (2000) d'Anne Villacèque. Sa carrière lancée, il joue dans Les Declassés (2001) et Reines d'un jour (2000). Dans des premiers longs métrages, il incarne le compagnon maladroit d'Hélène Fillières dans Bord de mer (2002) de Julie Lopes-Curval, et danse Le Tango des Rashevski (2003) pour Sam Garbarski. Le grand public le découvre véritablement aux côtés d'Agnès Jaoui et Karin Viard dans Le Rôle de sa vie (2004), puis dans un rôle de mort-vivant dans Les Revenants (2004) de Robin Campillo. Il partage en 2005 avec Hélène de Fougerolles la tête d'affiche du film Le plus beau jour de ma vie, une comédie populaire sur le mariage. Dans un registre plus noir, il incarne un agent immobilier escroc aux côtés de Romain Duris dans De battre mon coeur s'est arrêté de Jacques Audiard. En décembre 2010 il fit partie du jury de la seconde édition du Festival de Cinéma Européen des Arcs, Jury notamment présidé par Thomas Vinterberg. En février 2011, lors de la première cérémonie des magritte du cinéma (équivalent des césar pour le cinéma belge francophone), il reçoit le magritte du meilleur acteur pour le film "Elève libre". Il est le fils de la peintre Sarah Kalisky et le neveu du dramaturge René Kalisky.
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“ La chronique aurait pu être délicieuse, mais ni Zaccaï ni Lacoste ne forcent leur talent. D'où le long délitement de ce projet raté. ”— tomsias25 août 2014
“ Si parisien, concept, du mal a donner un fil, mais Vincent Lacoste a la gueule qui va bien. Unique film de Jonathan Zaccaï, nanar sympa ”— CedricRamoul 2 mars 2014
“ Zaccaï ne semble pas faire la différence entre prendre en dérision et prendre les gens pour des cons. Caricatural à outrance. Un vrai navet. ”— thibaultl 2 septembre 2016