Née à Savannah, Georgie et élevée à Bainbridge, elle finit ses études dans le Vermont et à l'université de Syracuse à New York. À 20 ans, elle devient "chorus-girl". En 1930, elle signe un contrat avec la Paramount Pictures, et tourne son premier film : Fast and Loose.
Au cours des années 30, elle joue dans
Le Lieutenant souriant (1931), Docteur Jekyll et M. Hyde (1931),
Becky Sharp (1935), pour lequel elle obtient une nomination à l'Oscar de la meilleure actrice, Ville sans loi (1935), Ils étaient trois (1936) et
La Vieille Fille (1939). Son film le plus marquant de cette époque reste le chef d'oeuvre d'
Ernst Lubitsch Sérénade à trois (1932) où elle impose un personnage plein de charme et d'esprit.
Miriam Hopkins a fait partie de la cohorte d'actrices auditionnées pour le rôle de Scarlett O'Hara dans
Autant en emporte le vent. Elle partait avec un avantage sur ses concurrentes, étant la seule à être vraiment originaire de Géorgie. Mais cela ne suffira pas, et le rôle ira à
Vivien Leigh, talonnée par Paulette Goddard.
Bette Davis écrira plus tard que l'insécurité dont souffrait Miriam Hopkins la conduisait à des comportements de forte rivalité sur les plateaux. Après leurs deux collaborations (
La Vieille Fille (1939) et L'Impossible Amour (1943), Miriam Hopkins ne tourne plus pendant 6 ans. Elle tourne à nouveau en 1949 dans L'Héritière, puis elle revient à la comédie en incarnant la mère de
Gene Tierney dans La Mère du marié en 1951.
Elle a été mariée quatre fois : à l'acteur Brandon Peters, à l'aviateur Austin Parker, au réalisateur
Anatole Litvak, et au journaliste correspondant de guerre Raymond B. Brock. En 1932, Miriam Hopkins adopte un garçon, Michael Hopkins.
Elle meurt à New York d'une crise cardiaque, 9 jours avant de fêter ses 70 ans.
Elle a deux étoiles sur le Hollywood Walk of Fame : une pour le cinéma au 1701 Vine Street, et une pour la télévision au 1708 Vine Street.