Il débute sa carrière dans le film de John Huston, L'Honneur des Prizzi (1985), mais c'est avec ses rôles dans L'Affaire Pélican (1993) où il interprète un tueur et Kiss of Death (1995) où il incarne un procureur malhonnête qu'il se fait remarquer. Depuis, on l'a vu dans deux films avec Tom Hanks : Les Sentiers de la perdition (2002), où il joue Frank Nitti et Le Terminal (2004) où il incarne un chef de sécurité d'aéroport, et aussi dans Shall We Dance? (2004). Il devient Stanley Kubrick pour les besoins du Moi, Peter Sellers (2004). L'année 2006 est chargée pour l'acteur : au cinéma, il participe au Diable s'habille en Prada, en étant le fidèle associé de Meryl Streep, mais c'est à la télévision qu'on le remarque durant cette année avec son interprétation, en tant que guest star, du Dr Kevin Moretti dans la série télévisée Urgences qu'il incarnera durant quelques épisodes. En 2009, il est à l'affiche de Julie & Julia, où il incarne Paul Child, le mari de Julia Child, interprétée par Meryl Streep. C'est leur deuxième collaboration depuis Le Diable s'habille en Prada. En 2010, il incarne Mr. Harvey, le tueur de Lovely Bones. Il est d'ailleurs nommé aux Oscars dans la catégorie "Meilleur acteur dans un second rôle" pour celui-ci. Le même année, il joue au côté de Cher et Christina Aguilera dans la comédie musicale Burlesque.
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“ Jackson change de contexte avec le même talent. Emotions, frissons, un Wahlberg étonnant, un Tucci effrayant, un petit rêve sur grand écran ”— ManuBestOfPlus 2 juillet 2014
“ Stanley Tucci est une bête & l'histoire ne manque pas d'émotion mais l'univers numérique de Jackson est écrasant et la fin décevante. ”— Szerelem 1 mai 2012
“ Film familial par excellence, Beethoven ne vaut aujourd'hui que pour son lot d'apparitions improbables (Tucci, Duchovny, Gordon-Levitt). ”— Piwi15 août 2014
“ Comédie croquante et craquante avec un diable de talent, une fraîche innocente servis par les excellents Emily Blunt & Stanley Tucci. Bath ! ”— Lyson 8 septembre 2015
“ Je comprends Tucci... 9 mois avec Tom Hanks dans les pattes, tu parles d'une malédiction ! Sinon, bons sentiments quoi (Cf : Tom Hanks). ” ”— SadbutSad 8 août 2012