Diplômée en science politique et se destinant à une carrière juridique, Maria Bello se consacre finalement au théâtre en se produisant dans des pièces comme The Killer Inside Me, Smart Town Gals ou encore Big Problems. Elle se voit proposer un rôle régulier à la télévision dans la série d'espionnage Mr. et Mrs. Smith (1996), aux côtés de Scott Bakula, puis devient la pédiatre passionnée Anna Del Amico dans le très populaire feuilleton Urgences (1997-1998), personnage pour lequel elle remporte un Screen Actors Guild Award. Après avoir côtoyé Ben Stiller et Elizabeth Hurley dans le drame Permanent Midnight (1998) de David Veloz, Maria Bello interprète une prostituée, partenaire de Mel Gibson, dans le polar Payback(1999). L'année suivante, elle tourne un documentaire au format Imax intitulé Expédition panda en Chine. Son physique avantageux et sa fraîcheur lui permettent d'incarner tour à tour un manager de bar dans Coyote Girls (2000), une chanteuse de karaoké dans Duos d'un jour (2001) ou encore une comédienne de la série Papa Schultz dans Auto Focus (2003) de Paul Schrader. Tentée par le thriller, Maria Bello campe l'ex-épouse de Johnny Depp dans Fenêtre secrète (2004), l'adaptation d'une nouvelle de Stephen King, devient l'atout charme de Assaut sur le central 13 (2005), se fait diriger par David Cronenberg dans A History Of Violence (id.) et cède au Chantage de Pierce Brosnan en 2008. Egalement au casting du World Trade Center (2006) d'Oliver Stone, elle renoue avec l'action pour La Momie 3 : La Tombe de l'empereur Dragon (2008).
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“ Il y a une force indéfinissable dans ce thriller qui fait que je l'ai beaucoup aimé. Et en plus du mystère qui plane, il y a Maria Bello. ”— unecinephile23 septembre 2012
“ Assaut sur le central 13 ou le plaisir du huis-clos avec Maria Bello et Drea de Matteo dans un remake réussi qui sent bon la french-touch. ”— Cinespeedy15 février 2015
“ Dur dur d'innover dans le rape & revenge. Facture télévisuelle correcte mais le récit s'avère au final peu captivant. Et Maria Bello alors ? ”— cineMANbis 2 juin 2023